高效液相色譜儀在進行多成分的復雜樣品分離時，經(jīng)常會碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術。

        在高效液相色譜儀中流速（壓力）梯度洗脫和溫度梯度洗脫效果不大，而且會帶來一些不利影響，因此，高效液相色譜儀中的梯度洗脫通常是指流動相梯度洗脫，即在分離過程中改變流動相的組成或濃度。高效液相色譜儀的梯度洗脫技術有線性梯度洗脫、階梯梯度洗脫、高壓梯度洗脫和低壓梯度洗脫等。

一、線性梯度洗脫：

        在某一段時間內(nèi)連續(xù)而均勻增加流動相強度。

二、階梯梯度洗脫：

        直接從某一低強度的流動相改變?yōu)榱硪惠^高強度的流動相。

三、高壓梯度洗脫：

        采用兩臺高壓輸液泵，分別按設定的比例輸送A和B兩種溶液至混合器，混合器在泵之后，兩種溶液在高壓狀態(tài)下混合。

        優(yōu)點：通過梯度程序控制器控制每臺泵的輸出，就能獲得任意形式的梯度曲線，而且精度很高，易于實現(xiàn)自動化控制。

        缺點：使用了兩臺高壓輸液泵，儀器價格昂貴，故障率相對較高，而且只能實現(xiàn)二元梯度洗脫。

四、低壓梯度洗脫：

        只需一臺高壓輸液泵，與等度洗脫相比，在泵前安裝了一個比例閥，混合在比例閥中完成。比例閥在泵之前，溶液在常壓（低壓）下混合。在常壓下混合容易形成氣泡，通常需要配置在線脫氣裝置。

        四元梯度洗脫過程：來自于四種溶液瓶的四根輸液管分別與在線真空脫氣裝置的四條流路相接，經(jīng)脫氣后的四種溶液進入比例閥，混合后從一根輸出管進入高壓輸液泵。