頂空氣相色譜測定啤酒中乙酸的含量

　　乙酸是啤酒中含量最高的有機(jī)酸，它是啤酒正常發(fā)酵產(chǎn)物，由乙醛氧化而來，是啤酒中對口感影響最大的酸味物質(zhì)。

　　乙酸，俗稱為醋酸，相對分子質(zhì)量60.05，純醋酸在16.6℃以下會凝固成冰狀，故又稱為冰醋酸，其分子式為CH3COOH。

　　醋酸是無色水狀液體，具有強(qiáng)烈刺鼻的特征酸味，極易溶于醇、醚、甘油和CCI4，不溶于CS2，遇明火、高熱、強(qiáng)氧化劑易引起燃燒，有腐蝕性，能灼傷皮膚。

　　乙酸形成的途徑有以下兩條：一條是發(fā)酵前期麥汁含量高和貯酒中不斷通風(fēng)的情況下，由乙醛和乙醇氧化形成;另一條是在發(fā)酵后期，酵母吸收丙酮酸進(jìn)行岐化反應(yīng)，形成乙酸和乳酸。啤酒酵母在滅菌麥汁中只形成少量的乙酸，若污染雜菌，則生成大量乙酸。因此，在發(fā)酵中檢出酒的揮發(fā)酸以乙酸為主，也是作為發(fā)酵是否正常的標(biāo)志之一。

　　啤酒中含有有機(jī)酸約100種以上，多數(shù)有機(jī)酸都具有酸味，它是啤酒的重要口味成分之一，酸類不構(gòu)成啤酒香味，酸味和其他成分協(xié)調(diào)配合，即組成啤酒的酒體，有機(jī)酸是成品啤酒中一類非常重要的風(fēng)味物質(zhì)，適量的有機(jī)酸賦予啤酒愉快的口感，缺乏酸類的啤酒顯得呆滯、粘稠、不爽口，而酸過量或者種類太單調(diào)，又會使啤酒口感粗糙、不柔和、不協(xié)調(diào)，同時引起酸露頭，減低啤酒飲用性。因此，研究啤酒釀造過程的有機(jī)酸，通過代謝監(jiān)控酸的種類和含量，將直接影響到啤酒的品質(zhì)和風(fēng)味。

　　啤酒中揮發(fā)酸控制標(biāo)準(zhǔn)為80mg/L，如大于100mg/L則為明顯污染發(fā)酵。

　　乙酸的測定傳統(tǒng)方法采用常規(guī)水蒸氣蒸餾法，此方法既費(fèi)時費(fèi)力，且其中包括少量雜質(zhì)，如甲酸、丁酸、戊酸等揮發(fā)脂肪酸，所以誤差比較大。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在可采用液相色譜法和離子色譜法測定，但此儀器價格不菲，且在啤酒業(yè)應(yīng)用面不廣，對中小啤酒企業(yè)來說不太現(xiàn)實，所以，筆者嘗試研究用頂空進(jìn)樣器----氣相色譜方法建立一種簡單快速的檢測啤酒中乙酸的測定方法，供同行參考指正。

　　1實驗部分

　　1.1儀器和試劑

　　1.1.1儀器裝置

　　氣相色譜儀(配有FID檢測器)

　　全自動頂空進(jìn)樣器

　　20mL頂空進(jìn)樣瓶，電子天平(精度0.0001)，微量自動移液器，1mL、5mL、10mL、20mL、25mL移液管，100mL容量瓶，5mL量筒。

　　1.1.2試劑

　　色譜純乙酸，色譜純無水乙醇，重蒸水

　　1.1.3色譜條件

　　毛細(xì)管柱DM-WAX色譜柱(30m×0.53×2um)

　　進(jìn)樣口溫度200℃，檢測器溫度260℃，載氣：氮?dú)?10mL/min)，分流比10：1

　　色譜柱升溫程序：35℃保溫3min，10℃/min升溫至90℃，保溫1min，30℃/min升到220℃。

　　頂空進(jìn)樣器程序：柱溫85℃保溫30min，取樣器針溫120℃，傳輸線溫度120℃，

　　進(jìn)樣時間2s，頂空進(jìn)樣器載氣壓力120kpa。

　　1.2標(biāo)準(zhǔn)試劑的配制

　　1.2.1乙酸標(biāo)樣的配制

　　1.2.1.1稱取乙酸6.00mg，加入100mL容量瓶用無水酒精定容至100mL。

　　1.2.1.2取1mL1加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL。

　　1.2.1.3取21mL加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL為6ppm乙酸溶液。

　　1.2.1.4取22mL加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL為12ppm乙酸溶液。

　　1.2.1.5取25mL加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL為30ppm乙酸溶液。

　　1.2.1.6取210mL加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL為60ppm乙酸溶液。

　　1.2.1.7取215mL加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL為90ppm乙酸溶液。

　　1.2.1.8取220mL加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL為120ppm乙酸溶液。

　　1.2.1.9取230mL加入100mL容量瓶中，用4%酒精定容至100mL為180ppm乙酸溶液。

　　1.3樣品預(yù)處理

　　將啤酒樣品放于冰箱冷藏24小時，不除氣量取5mL于頂空進(jìn)樣瓶，頂空自動進(jìn)樣分析。

　　1.4乙酸定性定量方法

　　1.4.1乙酸定性

　　以標(biāo)準(zhǔn)樣品保留時間、樣品加標(biāo)來定性。

　　1.5乙酸定量

　　將乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述色譜條件和頂空條件下進(jìn)樣，以峰面積外標(biāo)法定量，用色譜軟件N3000建立色譜方法(標(biāo)準(zhǔn)曲線方程)自動計算結(jié)果。

　　乙酸定量結(jié)果表達(dá)

　　X=A1×C/As式中：

　　X---樣品中乙酸含量mg/L

　　A1---樣品溶液峰面積

　　AS---乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積

　　2實驗結(jié)果與討論

　　2.1氣相色譜標(biāo)準(zhǔn)方法的建立

　　將乙酸標(biāo)樣12ppm、30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm

　　和180ppm分別取5mL于頂空瓶中封口后，在頂空進(jìn)樣器程序進(jìn)樣分析，得到在不同濃度下所對應(yīng)的色譜峰面積，根據(jù)此面積和濃度利用色譜N3000軟件多點(diǎn)校正建立外標(biāo)分析方法，保存?zhèn)溆谩?

　　2.2樣品的分析

　　將樣品放置冰箱中冷藏24小時，用量筒量取5mL于頂空進(jìn)樣瓶，在和標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣的頂空進(jìn)樣器程序下自動進(jìn)樣分析。

　　2.3樣品數(shù)據(jù)處理

　　將樣品譜圖打開，加載建立的標(biāo)準(zhǔn)方法，自動得出乙酸數(shù)。

　　2.3精密度與重現(xiàn)性實驗

　　取同一標(biāo)準(zhǔn)樣品，按外標(biāo)法進(jìn)樣在同條件下六次重復(fù)檢測測定結(jié)果見表1。

　　2.4回收率試驗

　　分別往啤酒里面添加20mg/L，30mg/L，40mg/L乙酸，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗結(jié)果見表2。

　　2.5不同品牌啤酒，用液相色譜和氣相色譜檢測乙酸結(jié)果對比。

　　取不同品種同一批樣品分別用氣相色譜和液相色譜檢測，驗證氣相色譜檢測乙酸的準(zhǔn)確度，檢測結(jié)果見表3。

　　3結(jié)論

　　3.1從以上精密度實驗中變異系數(shù)在5%以下，說明該方法精密度和重復(fù)性都很好，符合微量分析的要求。

　　3.2同一樣品回收率測定結(jié)果均在90%-105%之間，在色譜分析中是可以接受的，可以滿足日常分析要求。

　　3.3從液相色譜和氣相色譜測定結(jié)果對比來看，測定誤差在5%左右，可以接受。

　　4注意事項

　　4.1保證進(jìn)樣量、色譜分析條件嚴(yán)格不變。

　　4.2標(biāo)準(zhǔn)方法應(yīng)定期校正，保證測定結(jié)果準(zhǔn)確性。

　　4.3樣品在密封進(jìn)取樣瓶后，應(yīng)盡快分析檢測，不宜放置時間過長，防止氧化使檢測結(jié)果偏高。

　　[參考文獻(xiàn)]

　　[1]李紅,陳元,郭瑞涵和張五九等.啤酒乙酸的來源、形成機(jī)理、影響機(jī)制的研究及基于人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的預(yù)測模型.啤酒科技，2007(9).

　　[2]《酒業(yè)質(zhì)量技術(shù)參考》.2005(2)中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院主辦.